In deze handleiding wordt uitgelegd hoe je een paddo-kweek kunt starten met een sporen print. Er zijn verschillende opties. Je kunt de sporen gebruiken om een sporen spuit te maken, of de sporen direct enten op gesteriliseerd graan. Deze handleiding beschrijft echter hoe je de sporen via agar laat ontkiemen. Dit is het makkelijkst en heeft een erg lage kans op besmetting.

Aan de slag

Om te beginnen raden we aan het werken met sporen printen uitsluitend voor een Laminar Flow Hood (LFH), of in een Still Air Box (SAB) te doen. Doordat de sporen via de open lucht op een kiemplaats gebracht worden is de kans op besmettingen namelijk hoger dan als de sporen via een steriele spuit worden geïnjecteerd.

Benodigdheden

Voor je aan de slag gaat heb je eerst een aantal Items nodig. We zetten ze hieronder op een rijtje:

1. SpaceJars sporen print (hier verkrijgbaar)
2. Steriele petrischaaltjes geprepareerd met Agar
3. Steriele scalpel (hier verkrijgbaar)
4. Nitril handschoentjes (hier verkrijgbaar)
5. Mondmasker (hier verkrijgbaar)
6. 70% Isopropyl alcohol (hier verkrijgbaar)
7. Parafilm
8. LFH of SAB (handleiding SAB)

Agar Agar

In de mycologie wereld wordt erg veel gebruik gemaakt van agar. Agar is een soort veganistische gelatine, die als voedingsbodem wordt gebruikt om bacteriën of in ons geval, schimmels te kweken. Je kunt via een petrischaaltje met agar gemakkelijk vroegtijdig contaminaties spotten. Daarnaast kun je zelfs al heb je een contaminatie, alsnog het mycelium redden door het schone mycelium te verwijderen en op een nieuw petrischaaltje aan te brengen.

De steriele petrischaaltjes gevuld met agar kun je eenvoudig thuis zelf maken. De steriele petrischaaltjes zijn online verkrijgbaar. Je kunt zelf kiezen of je ze kant-en-klaar koopt, of thuis zelf wilt vullen met agar. In deze handleiding gaan we ervanuit dat je de petrischaaltjes klaar hebt voor gebruik.

Voorbereiding

Zoals altijd geldt; ga zorgvuldig en hygiënisch te werk. Leg alle benodigdheden klaar in de SAB of voor de LFH. Draag schone kleding, was je handen en armen met zeep en water, draag nitrilhandschoentjes en een mondmasker. Voor je de sporen gaat overbrengen maak je alles wat je aan gaat raken schoon met 70% Isopropyl alcohol.

Inoculeren

Zodra je klaar bent om te beginnen vouw je voorzichtig de sporenprint open. Zorg dat zowel het Petri schaaltje als de sporenprint zo kort mogelijk zijn geopend, en zorg dat behalve je steriele scalpel niks boven de sporenprint of Petrischaal komt. Schraap voorzichtig wat sporen op het agar, en sluit daarna het Petri schaaltje weer.

Je hoeft maar heel weinig sporen op het agar te krijgen; één klein zwart spikkeltje bevat al tienduizenden sporen.

Op de bovenstaande foto zijn veel te veel sporen aangebracht. Dit kan op zich geen kwaad, maar ieder zwart spikkeltje had een eigen petrischaaltje kunnen inoculeren. Als je de petrischaaltjes hebt geïnoculeerd moet je ze nog afsluiten. Hier wordt doorgaans parafilm voor gebruikt, omdat het perfect aansluit op de petrischaaltjes, contaminaties tegenhoud, maar lucht doorlaat.

Incubatie

Label al je petrischaaltjes zodat je nog weet welke soorten je hebt geïnoculeerd en laat de sporen ontkiemen op de ideale groeiomstandigheden. Voor de meeste Cubensis soorten is dit in het donker, bij ongeveer 24-29 graden Celsius. Na 2-3 weken zullen de petrischaaltjes overgroeit zijn met mycelium.

Vervolg

Als alles goed is gegaan heb je nu schone petrischaaltjes doorgroeit met mooi wit mycelium. Contaminaties zijn gemakkelijk te spotten door ronde vlekjes, ander gekleurde schimmels, ect. Eigenlijk alles wat niet mooi wit mycelium is, is fout.

Als je een schaaltje hebt met heel mooi wit mycelium, maar aan een kant een contaminatie, kun je het mycelium alsnog redden. Snij een klein stukje agar met schoon mycelium af, en plaats op een nieuw petrischaaltje. Uiteraard met volledige hygiënische voorbereiding en in een SAB of voor een LFH. Als het goed is gegaan zal dit stukje mycelium het nieuwe petrischaaltje overgroeien zonder contaminaties.

Vanuit een schoon doorgroeit petrischaaltje kun je verschillende kanten uit:

1. Agar-to-grain: Je snijdt een stukje agar af en doet dit een pot gesteriliseerd graan om paddo broed te maken.
2. Agar-to-agar: Je wilt meer petrischaaltjes maken, snij kleine stukjes agar af en plaats deze op nieuwe petrischaaltjes om het mycelium te vermenigvuldigen.
3. Agar-to-LC: Je snijdt een stukje agar af en inoculeert hiermee een gesteriliseerde liquid culture. Als de liquid culture goed is gekoloniseerd kan je daar vervolgens je broed weer mee inoculeren.

Zoals bij paddo’s kweken vaak het geval is zijn er veel opties en veel verschillende technieken. Vergeet niet om je eigen kweekproces te observeren en waar nodig te corrigeren; elk kweekproject is een leerervaring.

Blijf experimenteren en leren, maar vooral: geniet van het kweken en succes!

AANBEVOLEN PRODUCTEN